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    Antigenic peptides capable of inducing specific antibodies for detection of the major alterations found in type 2B von willebrand disease.
    (2013) Paro, Marina de Oliveira; Ferreira, Cyntia Silva; Vieira, Fernanda Silva; Santana, Marcos Aurélio de; Borges, William de Castro; Lopes, Maria Sueli Silva Namen; Leclercq, Sophie Yvette; Rodrigues, Cibele Velloso; Andrade, Milton Hércules Guerra de
    VonWillebrand disease (VWD) is an inherited hemorrhagic disorder promoted by either quantitative or qualitative defects of the von Willebrand factor (VWF). The disease represents the most common human coagulopathy afflicting 1.3% of the population. Qualitative defects are subdivided into four subtypes and classified according to the molecular dysfunction of the VWF. The differential diagnosis of the VWD is a difficult task, relying on a panel of tests aimed to assess the plasma levels and function of the VWF. Here, we propose biochemical approaches for the identification of structural variants of the VWF. A bioinformatic analysis was conducted to design seven peptides amongwhich threewere representatives of specific amino acid sequences belonging to normal VWF and four encompassed sequences found in the most common VWD subtype 2B. These peptides were used to immunize mice, after which, peptide-specific immunoglobulins were purified. This resulted in four Ig preparations capable of detecting alterations in the subtype 2B VWD plus additional three antibody fractions targeting the normal VWF. The panel of antibodies could serve many applications among them (1) assessment of VWF: antigen interaction, (2) VWF multimer analysis, and (3) production of monoclonal antibodies against VWF for therapeutic purposes as in thrombotic thrombocytopenic purpura.
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    Aperfeiçoamento de nanobiossensor plasmônico para diágnostico direto de flavivirus.
    (2023) Santos, Samara Mayra Soares Alves dos; Silva, Breno de Mello; Ferreira, Cyntia Silva; Silva, Breno de Mello; Ferreira, Cyntia Silva; Andrade, Lídia Maria de; Cardoso, Marcus Vinícius Cangussu
    As doenças humanas associadas aos flavivirus causam crescente morbidade e mortalidade em todo o mundo. Essas doenças têm se espalhado consideravelmente nos últimos anos, e alguns fatores dificultam seu diagnóstico, tais como a reatividade antigênica cruzada, combinada com sintomas similares entre as infecções causadas por vírus pertencentes a essa família, a co- circulação de diferentes flavivirus e pouco acesso a ferramentas avançadas de diagnóstico laboratorial. As metodologias para diagnóstico de tais vírus passam por contínuas mudanças, de forma a aprimorar alguns parâmetros tais como sensibilidade, especificidade, baixo custo e acessibilidade. Nesse contexto, a Nanotecnologia vem ganhando espaço considerável para o aprimoramento de tais métodos, contando com uma ampla gama de nanomateriais disponíveis com propriedades particulares e vantajosas. Para esse trabalho, foi desenvolvido um biossensor por meio da ressonância plasmônica de superfície localizada (LSPR) utilizando nanobastões de ouro funcionalizados à polietilenoimina 0,3% e à 0,3 μg/mL de anticorpos anti-flavivirus D1- 4G2-4- 15/ATCC® HB-112TM. Tal biossensor foi testado com diferentes concentrações de vírus (106 , 105 , 104 , 103 e 102 ) expressas em UFP/mL. Foram usados como controle positivo o Dengue virus e o Zika virus (ambos pertencentes ao gênero flavivirus) e como controles negativos o Mayaro virus e o Chikungunya virus (ambos do genêro Alphavirus). O biossensor foi capaz de detectar os vírus de interesse em todas as concentrações analisadas. Foi utilizado o Teste t de student para análises de duas varáveis e o Teste one-way Anova juntamente com a análise Sidak’s para comparar múltiplas variáveis. Os dados foram normalizados usando o software GraphPad Prism versão 8.0. Com base nos dados obtidos observa-se que o biossensor conseguiu detectar e diferenciar os vírus do gênero flavivirus na faixa de concentração entre 106 e 102 UFP/mL.
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    Atividade anti-angiogênica de inibidores de tripsina em membrana corioalantóica de Gallus domesticus.
    (Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2013) Ferreira, Cyntia Silva; Andrade, Milton Hércules Guerra de
    Os inibidores do tipo Bowman-Birk (BBI) são proteínas contendo dois domínios inibitórios distintos para enzimas tripsina- e quimotripsina-símile. Muitos trabalhos mostram o uso desses inibidores como agentes anti-cancerígenos, no entanto, estudos prévios do nosso laboratório revelaram uma biodistribuição limitada do BBI. Peptídeos sintéticos análogos aos domínios inibitórios do BBI também apresentaram baixa biodisponibilidade, possivelmente devido à degradação. Com o objetivo de construir inibidores mais estáveis foram adicionados motivos do tipo dedo de zinco – sequências de aminoácidos com reconhecida função estabilizadora. Esses inibidores (CPI- e HPI-trip, para tripsina e CPI- e HPI-quimo, para quimotripsina) foram comparados ao inibidor nativo e às suas respectivas alças de inibição YCT-trip e YCA-quimo. A estabilidade dessas espécies químicas foi testada do ponto de vista térmico, redutor e de resistência à hidrólise. Os peptídeos sintéticos contendo dedo de zinco mostraram comportamento similar aos inibidores convencionais. A atividade biológica dos inibidores foi avaliada no complexo proteolítico proteassoma 20S de Ratos Wistar e em membrana corioalantóica de Gallus gallus domesticus. Os inibidores de quimotripsina apresentaram atividade inibitória sobre o proteassoma 20S, mas não geraram alterações na membrana corioalantóica. Da mesma forma, os análogos contendo o motivo dedo de zinco apresentaram baixa atividade tanto no proteassoma quanto na membrana. Por outro lado, os inibidores de tripsina apresentaram atividade inibitória sobre o proteassoma e produziram respostas anti-angiogênicas na concentração de 100 nM, de maneira relacionada à atividade da pentamidina, – uma droga com elevada atividade anti-tripsina. Ao contrário da pentamidina, o inibidor Bowman-Birk é considerado isento de toxicidade em humanos, colocando essa classe de inibidores como potenciais drogas anti-angiogênicas.
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    Combination therapy with benznidazole and doxycycline shows no additive effect to monotherapy with benznidazole in mice infected with the VL-10 strain of the Trypanosoma cruzi.
    (2020) Carneiro, Ana Cláudia Alvarenga; Costa, Guilherme de Paula; Ferreira, Cyntia Silva; Ramos, Isalira Peroba Rezende; Sarandy, Mariáurea Matias; Leite, Ana Luísa Junqueira; Menezes, Ana Paula de Jesus; Silva, Breno de Mello; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho
    Background: Chagas heart disease is the most important clinical manifestation of Trypanosoma cruzi infection. Pharmacological therapies have been proposed aiming to reduce inflammatory response and cardiac damage in infected hosts. In this study, we investigated the use of doxycycline (Dox), in a sub-antimicrobial dose, in monotherapy and in combination with benznidazole (Bz) during the acute phase of infection with the VL-10 strain of T. cruzi, evaluating the therapeutic effect during the acute and chronic phases of the infection. Methods and results: C57BL/6 mice were treated for 20 days with Dox (30 mg/kg), Bz (100 mg/kg), or both drugs in combination starting 9 days after infection. Parasitemia was measured during the acute phase and the animals were monitored for 12 months, after which echocardiography analysis was performed. Blood samples were obtained from euthanized mice for CCL2, CCL5, IL-10 analysis, and cardiac fragments were collected for histopathological evaluation. Dox treatment did not ameliorate parasitological/inflammatory parameters but reduced the cardiac collagen neoformation (CN) in 35%. In contrast, Bz administration reduced parasitemia, plasma levels of CCL2 and CCL5, and cardiac infiltration during acute infection, and reduced the level of IL-10 and CN (95%) at 12 months. Dox was unable to improve ejection fraction, while Bz treatment ameliorated the ejection fraction. No additive effect was observed in combination therapy. Conclusion: Dox monotherapy is not effective in the acute or chronic phases of experimental cardiomyopathy induced by the VL-10 strain of T. cruzi. Furthermore, combination therapy with Dox does not potentiate the effects of Bz monotherapy.
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    Current strategies for diagnosis of paracoccidioidomycosis and prospects of methods based on gold nanoparticles.
    (2016) Ferreira, Cyntia Silva; Ribeiro, Erica Milena de Castro; Goes, Alfredo de Miranda; Silva, Breno de Mello
    Paracoccidioidomycosis (PCM) is a human systemic granulomatous mycosis caused by thermodimorphic fungi from Paracoccidioides genus. The disease is prevalent in Latin America and triggers a serious clinical condition. Consequently, rapid diagnosis and treatment are crucial to prevent progression of the disease, which can result in death. Currently, there are several established methods for PCM diagnosis. However, many of these tests still present challenges in terms of cost, accessibility and efficiency. In this scenario, gold nanoparticles represent a promising alternative since they have particular optical and electronic properties, which allow its use for biomolecules detection. This review will briefly present techniques available for PCM diagnosis and the perspectives of implementation of gold nanoparticles for diagnosis of this mycosis.
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    Desenvolvimento de livro sobre enfrentamento da obesidade para atualização docente.
    (2019) Ferreira, Cyntia Silva; Machado, Evandro Marques de Menezes; Moreira, Leandro Marcio; Estanislau, Juliana de Assis Silva Gomes; Zama, Uyrá dos Santos; Machado, Evandro Marques de Menezes; Moreira, Leandro Marcio
    Atualmente, a obesidade representa uma epidemia mundial, sendo alarmante sua alta prevalência em crianças e adolescentes. Em paralelo, a partir do ano de 2019, os currículos dos ensinos fundamental e médio devem incluir, de modo transversal, o tema educação alimentar e nutricional (EAN) nas disciplinas obrigatórias de ciências e biologia (Lei 13.666/2018 que altera a Lei de Diretrizes e Bases da Educação Nacional - LDB - Lei 9.394/1996). Esse cenário é favorável para abordagens educativas que trabalhem o enfrentamento da obesidade nas escolas; no entanto, não existe nenhum material para atualização docente nesse âmbito. Pensando na satisfatória implementação da lei supracitada e na prevenção e combate à obesidade, torna-se relevante o despertar da percepção desse tema nos professores. Para tanto, foi desenvolvido um livro para atualização docente sobre conceitos para enfrentamento da obesidade. Para elaboração do livro, foi realizada uma pesquisa bibliográfica utilizando uma série de descritores, isolados ou agrupados de diferentes formas, tais como: “obesidade infantil”; “prevenção obesidade escolares”; “obesidade mídia”; “obesidade bullying”. Em seguida, foi feita a seleção da amostra (n = 528) por meio de critérios de inclusão (ex.: artigos originais ou de revisão acessíveis on-line, completos e publicados nos idiomas português e inglês) e de exclusão (ex.: trabalhos publicados no formato de teses, dissertações, monografias, cartas e editoriais). Além disso, informações provenientes de livros acadêmicos e artigos científicos foram incorporadas na obra. O livro traz atualizações para que os docentes possam agregar a EAN e a divulgação científica (DC) em suas aulas, explorando um enfoque em ciência, tecnologia e sociedade (CTS), uma vez que aproxima o conteúdo teórico à realidade cotidiana, podendo gerar argumentações e reflexões críticas sobre o enfrentamento da obesidade. Além disso, são abordados conceitos bioquímicos da obesidade, como metabolismo e nutrição; aspectos culturais, como a influência da mídia; e ainda, questões sociais, como a prática de bullying. O livro, fruto dessa pesquisa, poderá auxiliar no despertar do interesse docente pelas inovações científicas e pelas atividades reflexivas e argumentativas no ensino de ciências.
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    Funcionalização de nanobastões de ouro para diagnóstico da paracoccidioidomicose.
    (2017) Ferreira, Cyntia Silva; Silva, Breno de Mello; Silva, Breno de Mello; Carvalho, Andréa Teixeira de; Sousa, Edésia Martins Barros de; Santos, Orlando David Henrique dos; Cota, Renata Guerra de Sá
    A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose granulomatosa sistêmica causada por duas espécies de um fungo termodimórfico: Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii. A doença é endêmica na América Latina e está associada a fatores sociais e econômicos. Embora a maioria das formas clínicas seja assintomática, podem ocorrer infecções severas e progressivas, envolvendo o tecido pulmonar e até mesmo o sistema nervoso central. Desse modo, sem uma intervenção terapêutica específica, o quadro da maioria dos pacientes acaba evoluindo para o óbito. Apesar da relevância da doença, não existe ainda um diagnóstico rápido e preciso com custo apropriado para as áreas endêmicas. Nesse sentido, uma alternativa é representada pelo uso de nanobastões de ouro (AuNBs), os quais possuem uma forte absorção característica no espectro visível (ressonância de plasmon) que pode ser monitorada por espectrofotometria. Considerando o uso dos AuNBs como biosensores, os mesmos foram funcionalizados com ácido lipóico ou polietilenoimina (ligantes contendo grupos carboxílicos ou aminas livres que permitem a ligação com proteínas antigênicas ou imunoglobulinas, respectivamente). Tais conjugados foram testados na presença dos alvos purificados e também desafiados com soro de pacientes saudáveis e com paracoccidioidomicose comprovada, e soro de camundongos infectados. A ligação efetiva das biomoléculas em questão foi observada através do deslocamento do pico de absorção plasmônica longitudinal dos AuNBs, sendo satisfatórias quando empregadas as biomoléculas purificadas e quando desafiados com soro de camundongos infectados, para a detecção de antígenos. Esses resultados mostram que o sistema deve ser aprimorado para a detecção tanto de antígenos como de anticorpos em soro humano. O deslocamento observado para as biomoléculas purificadas e com o soro de camundongos pode justificar em parte, o sucesso do sistema de detecção proposto, já destacado pela literatura com outros tipos de biomoléculas, e coloca os AuNBs funcionalizados obtidos nesse trabalho como biosensores úteis para o estudo e desenvolvimento de novas abordagens de diagnóstico para a paracoccidioidomicose. Além disso, representa um avanço biotecnológico para o diagnóstico de doenças negligenciadas.
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    Nanobastões de ouro no desenvolvimento de um método de diagnóstico de paracoccidioidomicose.
    (2016) Dias, Bruna de Paula; Silva, Breno de Mello; Ferreira, Cyntia Silva; Lana, Gwenaelle Elza Nathalie Pound; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Silva, Breno de Mello
    A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose granulomatosa sistêmica causada por duas espécies de um fungo termodimórfico: Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii. A doença é endêmica na América Latina e apresenta o maior número de casos no Brasil. Embora a maioria das formas clínicas seja assintomática, podem ocorrer infecções severas e progressivas, envolvendo o tecido pulmonar, o sistema nervoso central e pode levar a óbito dependendo da gravidade. Assim, o diagnóstico precoce da doença torna-se essencial para dar início ao tratamento. Apesar disso, ainda não existe um diagnóstico rápido e preciso com custo apropriado para as áreas endêmicas. Nesse sentido, uma alternativa é representada pelo uso de nanobastões de ouro (AuNBs), os quais possuem uma forte absorção característica no espectro visível (ressonância de plasmon) que pode ser monitorada por espectrofotometria. Considerando o uso dos AuNBs como biosensores, os mesmos foram funcionalizados com polietilenoimina e bioconjugados com anticorpos anti-gp43. Tais conjugados foram testados na presença dos alvos purificados e também desafiados com soro de camundongos infectados. A ligação efetiva das biomoléculas em questão foi observada através do deslocamento do pico de absorção plasmônica longitudinal dos AuNBs, sendo satisfatórias quando empregadas as biomoléculas purificadas. Em amostras de soros o sensor não se comportou como esperado. Assim, o deslocamento observado para as biomoléculas purificadas mostram que o sistema deve ser aprimorado para a detecção de antígenos em amostras complexas e pode justificar em parte, o sucesso do sistema de detecção proposto. Além disso, a proposta representa um avanço biotecnológico para o diagnóstico de doenças negligenciadas.
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    Nanoparticles as vaccines to prevent arbovirus infection : a long road ahead.
    (2021) Souza, Gabriel Augusto Pires de; Rocha, Raíssa Prado; Gonçalves, Ricardo Lemes; Ferreira, Cyntia Silva; Silva, Breno de Mello; Castro, Renato Fróes Goulart de; Rodrigues, João Francisco Vitório; Vieira Júnior, João Carlos Vilela; Malaquias, Luiz Cosme Cotta; Abrahão, Jônatas Santos; Coelho, Luiz Felipe Leomil
    Arthropod-borne viruses (arboviruses) are a significant public health problem worldwide. Vaccination is considered one of the most effective ways to control arbovirus diseases in the human population. Nanoparticles have been widely explored as new vaccine platforms. Although nanoparticles’ potential to act as new vaccines against infectious diseases has been identified, nanotechnology’s impact on developing new vaccines to prevent arboviruses is unclear. Thus, we used a comprehensive bibliographic survey to integrate data concerning the use of diverse nanoparticles as vaccines against medically important arboviruses. Our analysis showed that considerable research had been conducted to develop and evaluate nanovaccines against Chikungunya virus, Dengue virus, Zika virus, Japanese encephalitis virus, and West Nile virus. The main findings indicate that nanoparticles have great potential for use as a new vaccine system against arboviruses. Most of the studies showed an increase in neutralizing antibody production after mouse immunization. Nevertheless, even with significant advances in this field, further efforts are necessary to address the nanoparticles’ potential to act as a vaccine against these arboviruses. To promote advances in the field, we proposed a roadmap to help researchers better characterize and evaluate nanovaccines against medically important arboviruses.
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    Uso de nanobastões de ouro para o desenvolvimento de aulas práticas de nanotecnologia.
    (2017) Ferreira, Cyntia Silva; Ladeira, Luiz Orlando; Leite, Cristiano Fantini; Fonseca, Flávio Guimarães da; Ribeiro, Erica Milena de Castro; Versiani, Alice Freitas; Silva, Jorge Fernando de Souza; Magalhães, Cíntia Lopes de Brito; Silva, Breno de Mello
    Use of gold nanoparticles functionalization experiment was conducted in a biotechnology summer course at UFOP as a model for the introduction of the laboratory practice in nanotechnology for postgraduate courses in the areas of chemistry and biotechnology. The gold nanorods were synthesized by the seed method and then, functionalized with anti-IL-6 antibodies using the reagents EDAC/NHS and polyethyleneimine (PEI). This nanocompound was tested against the binding with the specific antigen (IL-6) and changes in the longitudinal plasmon absorption spectrum showed the coupling efficiency, which was also verified by the decrease in zeta potential. The experiment was satisfactory, with a positive feedback from participants, and could be implemented in nanotechnology practical classes from postgraduate courses, as a way for improve education in the emergent area of nanobiotechnology.