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    Avaliação de problemas farmacoterápicos e fatores associados identificados em pacientes atendidos pelo serviço de conciliação de medicamentos em um hospital de médio porte de Minas Gerais.
    (2022) Ramalho, Paula Carneiro; Nascimento, Renata Cristina Rezende Macedo do; Guimarães, Andrea Grabe; Nascimento, Renata Cristina Rezende Macedo do; Costa, Josiane Moreira da; Jeremias, Wander de Jesus
    Introdução: Erros de medicação (EM) decorrentes da falha de comunicação entre profissionais de saúde, em diferentes níveis de cuidado, correspondem à causa mais frequente no surgimento de problemas relacionados ao uso de medicamentos (PRM). A conciliação de medicamentos (CM) é um serviço farmacêutico que visa a prevenção de EM resultantes de discrepâncias da prescrição. Objetivos: Avaliar PRM identificados por meio da CM na admissão hospitalar de pacientes, em um hospital de médio porte. Metodologia: Estudo transversal quantitativo que envolve um serviço de CM no período de março 2021 a fevereiro de 2022 de pacientes admitidos no setor clínica médica e que fazem uso de ao menos um medicamento de uso contínuo. A primeira entrevista do serviço de CM foi realizada em até 48 horas após admissão dos pacientes, sendo realizada a coleta de dados sociodemográficos, indicadores de saúde, informações detalhadas sobre a farmacoterapia domiciliar e análise de discrepância medicamentosa (DM) classificada como intencional e não intencional. Os medicamentos foram descritos conforme o segundo e quinto nível da Anatomic Therapeutic Chemical (ATC). O banco de dados foi construído em planilhas do Microsoft Excel. Foram variáveis desfechos, ocorrência de DM e PRM identificados pelos farmacêuticos na CM, sendo o PRM avaliado na população idosa. Além disso, avaliado a adesão médica às intervenções farmacêuticas . As análises descritivas e estatísticas foram realizadas no Software Stata 13.0, e o limiar de significância foi de 5%. Trabalho aprovado pelo Comitê de Ética de Pesquisa da Universidade Federal de Ouro Preto (CEP/UFOP), parecer no 4.845.642. Resultados: Fazer uso de ao menos um Medicamento Inapropriado para Idosos (MPI) (p<0,001), polifarmácia (p=0,014) e internações por doenças do aparelho circulatório (p=0,007) apresentaram relação significativa para a ocorrência de ao menos um PRM. Já a análise multivariada, verificou-se que a ocorrência de ao menos um PRM em idosos foi associada ao uso de pelo menos um MPI (RP: 2,33; IC95% 1,68 - 3,25), apresentar história de alergia medicamentosa (RP:1,48; IC 95% 1,07-2,06), internações por doenças infecciosas e parasitárias (RP:1,52; IC95% 1,16-2,01) e doenças do aparelho circulatório (RP:1,30; IC95% 1,00-1,70). As variáveis, faixa etária (p=0,005), polifarmácia (p<0,001), ser portador de ao menos uma das duas comorbidades mais prevalentes (hipertensão arterial ou diabetes mellitus) (p=0,001), internações por doenças infecciosas e parasitárias (p<0,001) e doenças do aparelho circulatório (p=0,040) possuem relação significativa para a ocorrência de ao menos uma DM em prescrições. Com relação à adesão da equipe médica foi observada correlação estatisticamente significativa com a presença de DM do tipo não intencional (p=0,002), via de relato a equipe médica (p<0,001) e internações por doenças do aparelho respiratório (p=0,006). Medicamentos utilizados no Diabetes Mellitus (p<0,001), agentes que atuam no Sistema Renina-Angiotensina (p=0,028), agentes modificadores de lipídio (p=0,026), Medicamentos para doenças obstrutivas das vias aéreas (p=0,001), nutrientes gerais (p=0,005) e medicamentos hormonais tireoidianos (p=0,002) foram associados à DM não intencional. Conclusão: O serviço CM é capaz de avaliar PRM na população idosa e identificar um percentual significativo de DM em prescrição. A caracterização da população e o conhecimento do perfil de medicamentos utilizados pelos pacientes é uma estratégia essencial para reduzir os EM durante a transição do cuidado. Sugere- se que a adesão médica está mais favorecida nos casos de contexto epidemiológico atual devido o estudo ter ocorrido em período de pandemia pela COVID-19. Sendo assim, o serviço de CM é capaz de promover segurança do paciente em âmbito hospitalar.
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    Caracterização de genes talin e os efeitos do silenciamento por RNAi usando miR-190 em Schistosoma mansoni.
    (2019) Paiva, Thales Henrique de; Cota, Renata Guerra de Sá; Cota, Renata Guerra de Sá; Jeremias, Wander de Jesus; Borges, William de Castro
    A esquistossomose é uma doença parasitária de grande importância econômica e social afetando aproximadamente 200mi/ano de pessoas no mundo. Causada pelo nematódeo do gênero Schistosoma (especificamente neste estudo o S. mansoni por ser o de maior prevalência no Brasil), continua sendo um desafio para a comunidade científica sua compreensão ampla e descoberta de novas tecnologias diagnósticas e terapêuticas. Este estudo realizado trata da caracterização in vitro e in silico da proteína talin bem como avaliar os efeitos ultraestruturais após silenciamento in vitro por seu microRNA intrônico miR-190 em vermes adultos. As proteínas Talinas são uma família de proteínas grandes adaptadoras que conectam uma família de moléculas de adesão celular chamadas integrinas aos filamentos de F-actina do citoesqueleto. Há dois tipos de genes Talin em vertebrados. Talin 1 é essencial para o processo de adesão celular mediado por integrinas enquanto o papel do Talin 2 é desconhecido. Duas entradas da proteína talina previamente anotadas no genoma do S. mansoni, identificadas como Smp_167010 e Smp_142630 foram objeto desse estudo. Análises de predição estrutural in silico foram feitas e observado um padrão diferencial de domínios funcionais (PFAM), bem como alto grau de similaridade e identidade com seus ortólogos (SWISS-MODEL) e os dados indicam que as duas entradas não são oriundas de splicing alternativo e sim de diferenciação e especiação com valores de bootstrap próximo ou atingindo 100 (filogenia). Amostras de vermes adultos machos e fêmeas, cercárias, esquistossômulos mecanicamente transformados (EMT3,5h – EMT-24h) e ovos de S. mansoni foram utilizados para traçar o perfil de expressão gênica por qRT-PCR usando o gene constitutivo EIF4E como controle endógeno. A expressão gênica relativa foi determinada pelo método 2 –ΔCq. A análise estatística foi realizada utilizando o teste one-way ANOVA (Tukey) com P<0,01. Foi observado um perfil de expressão gênica diferencial em Smp_167010 e Smp_142630 tanto entre as fases de vida do verme quanto entre os dois genes. Foi ainda observado alterações ultraestruturais significativas em vermes adultos machos expostos ao miR-190 em comparação ao controle com a presença de descamação, bolhas e fissuras enquanto nenhuma alteração em fêmeas foi identificado. Em conclusão vimos que o S. mansoni possui dois genes talin que indicam ter grande importância em sua biologia e que há retroregulação do gene talin por seu microRNA intrônico miR-190 que quando ofertado em meio livre interfere em processos biológicos e causa danos estruturais visíveis.
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    Deep sequencing of small RNAs reveals the repertoire of miRNAs and piRNAs in Biomphalaria glabrata.
    (2020) Queiroz, Fábio Ribeiro; Portilho, Laysa Gomes; Jeremias, Wander de Jesus; Babá, Élio Hideo; Amaral, Laurence Rodrigues do; Silva, Luciana Maria; Coelho, Paulo Marcos Zech; Caldeira, Roberta Lima; Gomes, Matheus de Souza
    BACKGROUND Biomphalaria glabrata snails are widely distributed in schistosomiasis endemic areas like America and Caribe, displaying high susceptibility to infection by Schistosoma mansoni. After the availability of B. glabrata genome and transcriptome data, studies focusing on genetic markers and small non-coding RNAs have become more relevant. The small RNAs have been considered important through their ability to finely regulate the gene expression in several organisms, thus controlling the functions like cell growth, metabolism, and susceptibility/resistance to infection. OBJECTIVE The present study aims on identification and characterisation of the repertoire of small non-coding RNAs in B. glabrata (Bgl-small RNAs). METHODS By using small RNA sequencing, bioinformatics tools and quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-qPCR), we identified, characterised, and validated the presence of small RNAs in B. glabrata. FINDINGS 89 mature miRNAs were identified and five of them were classified as Mollusk-specific. When compared to model organisms, sequences of B. glabrata miRNAs showed a high degree of conservation. In addition, several target genes were predicted for all the mature miRNAs identified. Furthermore, piRNAs were identified in the genome of B. glabrata for the first time. The B. glabrata piRNAs showed strong conservation of uridine as first nucleotide at 5’ end, besides adenine at 10th position. Our results showed that B. glabrata has diverse repertoire of circulating ncRNAs, several which might be involved in mollusk susceptibility to infection, due to their potential roles in the regulation of S. mansoni development. MAIN CONCLUSIONS Further studies are necessary in order to confirm the role of the Bgl-small RNAs in the parasite/host relationship thus opening new perspectives on interference of small RNAs in the organism development and susceptibility to infection.
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    Genome-wide identification, characterisation and expression profiling of the ubiquitin-proteasome genes in Biomphalaria glabrata.
    (2019) Portilho, Laysa Gomes; Duarte, Bruna Custódio Dias; Queiroz, Fábio Ribeiro; Ribeiro, Thales Henrique Cherubino; Jeremias, Wander de Jesus; Babá, Elio Hideo; Coelho, Paulo Marcos Zech; Morais, Enyara Rezende; Cabral, Fernanda Janku; Caldeira, Roberta Lima; Gomes, Matheus de Souza
    BACKGROUND Biomphalaria glabrata is the major species used for the study of schistosomiasis-related parasite-host relationships, and understanding its gene regulation may aid in this endeavor. The ubiquitin-proteasome system (UPS) performs post-translational regulation in order to maintain cellular protein homeostasis and is related to several mechanisms, including immune responses. OBJECTIVE The aims of this work were to identify and characterise the putative genes and proteins involved in UPS using bioinformatic tools and also their expression on different tissues of B. glabrata. METHODS The putative genes and proteins of UPS in B. glabrata were predicted using BLASTp and as queries reference proteins from model organism. We characterised these putative proteins using PFAM and CDD software describing the conserved domains and active sites. The phylogenetic analysis was performed using ClustalX2 and MEGA5.2. Expression evaluation was performed from 12 snail tissues using RPKM. FINDINGS 119 sequences involved in the UPS in B. glabrata were identified, which 86 have been related to the ubiquitination pathway and 33 to proteasome. In addition, the conserved domains found were associated with the ubiquitin family, UQ_con, HECT, U-box and proteasome. The main active sites were lysine and cysteine residues. Lysines are responsible and the starting point for the formation of polyubiquitin chains, while the cysteine residues of the enzymes are responsible for binding to ubiquitin. The phylogenetic analysis showed an organised distribution between the organisms and the clades of the sequences, corresponding to the tree of life of the animals, for all groups of sequences analysed. The ubiquitin sequence was the only one with a high expression profile found in all libraries, inferring its wide range of performance. MAIN CONCLUSIONS Our results show the presence, conservation and expression profile of the UPS in this mollusk, providing a basis and new knowledge for other studies involving this system. Due to the importance of the UPS and B. glabrata, this work may influence the search for new methodologies for the control of schistosomiasis.
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    Influência da doença de Chagas na farmacocinética do Benznidazol no modelo cão.
    (2022) Bandeira, Lorena Cera; Carneiro, Cláudia Martins; Pinto, Leonardo Santos Ribeiro; Carneiro, Cláudia Martins; Pinto, Leonardo Santos Ribeiro; Diniz, Andrea; Moreira, Fernanda de Lima; Veloso, Vanja Maria; Jeremias, Wander de Jesus
    A alta variabilidade na eficácia e na segurança da quimioterapia anti-chagásica envolvendo o benznidazol (BNZ) pode ser devido às alterações farmacocinéticas. Tais alterações podem ser ocasionadas pela inibição de enzimas de metabolismo e transportadores de membranas devido ao aumento de mediadores do processo inflamatório na doença de Chagas. O presente estudo avaliou o impacto das infecções experimentais aguda e crônica pela cepa Be-78 do T. cruzi na farmacocinética do BNZ no modelo cão. Foram investigados 19 cães (n= 10 cães com infecção aguda; n= 9 cães com infecção crônica), SRD, com idade entre 04-10 meses e peso entre 20-35 kg. Os cães de ambas as fases da infecção foram divididos em dois grupos, sendo o Grupo I (infectado não tratado) e Grupo II (infectado e tratado). O estudo foi divido em 4 ocasiões. Na Ocasião 1 (antes da infecção) foi realizada coleta de sangue para análise de perfil das citocinas IL-6, IFN-γ, IL-10 e TNF-α por meio de ensaio de ELISA. Na Ocasião 2 (após a infecção, antes do início do tratamento) foi coletado sangue para análise de citocinas e carga parasitária por meio de qPCR. Na Ocasião 3 (após 10, 30, 40 e 60 dias de dose múltipla oral 3,5mg/Kg/12h de BNZ) foi realizada coleta seriada de sangue no intervalo de dose de 12h para análise farmacocinética para o Grupo II; e coleta de sangue para análise de citocinas e carga parasitária para os Grupos I e II. Na Ocasião 4 (após 30 dias do término do tratamento) foi coletado sangue para análise de citocinas e carga parasitária. O BNZ nas amostras de soro foi quantificado por CLAE-DAD. O método bioanalítico validado seguindo o guia da ANVISA, apresentou ausência de efeitos matriz e residual; limites de quantificação, estabilidade, precisão e exatidão compatíveis para a análise do BNZ em soro. Os parâmetros farmacocinéticos do BNZ, obtidos a partir de um modelo não compartimental, foram similares entre os momentos de coleta seriada na Ocasião 3 na fase aguda e também na fase crônica da infecção. O perfil farmacocinético do BNZ obtido em cães na fase aguda da doença é semelhante ao observado em cães sadios (dados históricos do nosso grupo de pesquisa). Por outro lado, foi observado que a infecção crônica aumenta os valores de Cmax (9,70 vs 17,97), Css (7,70 vs 12,56) e AUC0-12 (90,39 vs 150,76), e ainda reduz Vdss (17,34 vs 9,20) e CLss (0,84 vs 0,56) quando comparados com o grupo de cães sadios. Em relação a fase aguda, a fase crônica também eleva os valores de Cmax (10,55 vs 17,97), Css (7,08 vs 12,56), Cmin (4,32 vs 8,25) e AUC0-12 (84,98 vs 150,76) e reduz Vdss (13,92 vs 9,20) e CLss (0,99 vs 0,56). Os mediadores inflamatórios IFN-γ, IL-10, TNF-α e IL-6 estão aumentados nas fases aguda e crônica da doença, sendo a IL-6 a citocina produzida em maior quantidade e a única com aumento significativo (em até 7 vezes) de suas concentrações séricas nos cães da fase crônica em relação à fase aguda, mesmo quando o tratamento com o BNZ é administrado. Nos grupos I e II da fase aguda é observada uma elevada carga parasitária na Ocasião 2 que é reduzida significativamente nas Ocasiões 3 e 4. Nos grupos I e II da fase crônica observa-se uma baixa carga parasitária nas Ocasiões 2 e 3, e um aumento significativo da carga parasitária na Ocasião 4. Portanto, a infecção crônica experimental pela cepa Berenice-78 do T. cruzi altera significativamente a farmacocinética do BNZ em cães, provavelmente pela inibição do transporte de membrana glicoproteína-P (P-gp) causada pelo aumento da citocina pró-inflamatória IL-6.
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    Localização física do BAC clone AL 619337 no genoma de Schistosoma mansoni utilizando a técnica de FISH (fluorescence in situ hybridization).
    (Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2004) Jeremias, Wander de Jesus; Babá, Élio Hideo
    A Esquistossomose, também conhecida como “Bilharziose” ou, popularmente, “Barriga d’água” ou “Chistosa” é uma doença crônica e debilitante ou mesmo fatal em alguns casos, que afeta principalmente indivíduos em áreas rurais, sendo endêmica em países tropicais e subtropicais. È causada pelo platelminto trematódeo digenético Schistosoma mansoni. Devido a sua grande importância sócio-econômica da doença em países em desenvolvimento, foi montado um projeto para seqüenciamento e estudo do genoma de seu agente etiológico, o S. mansoni. A ênfase inicial do projeto foi dada na etapa de seqüenciamento de cDNA, devido à existência de poucos genes seqüenciados do parasita. Como parte deste projeto, iniciou-se a construção de um mapa físico do genoma do S. mansoni. E para a consolidação de tal mapa, a localização física de grandes fragmentos de DNA genômico clonados em vetores BAC e YAC no genoma do parasita por meio da técnica de FISH (“Fluorescence in situ Hybridization”) é de fundamental importância. Neste trabalho, o DNA do BAC clone AL619337, desde então denominado BAC2A, foi fisicamente localizado no genoma do S. mansoni por meio da técnica de FISH. Foi estabelecido como 28 dias o melhor tempo de infecção do caramujo hospedeiro para obtenção de maior número de células metafásicas do parasita por lâmina. Uma vez ajustada a concentração do fluoróforo PI com qual os cromossomos metafásicos do parasita foram contra corados e também do conjugado Avidina-FITC, o sinal de hibridização foi visualizado na região de transição entre eucromatina e heterocromatina do braço curto do cromossomo sexual W em todas as metáfases de fêmea observadas. Não foi observado sinal homólogo no outro cromossomo sexual Z, mostrando que o DNA localizado é específico de fêmeas de S. mansoni. Trabalhos desta natureza permitem obter informações sobre a estrutura do genoma. Tais informações associadas a outras referentes à função de determinado gene permitem responder questões determinantes na patologia causada por este importante parasita.
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    Physical localization of the retrotransposons Boudicca and Perere 03 in Schistosoma mansoni.
    (2008) Valentim, Cláudia Laignier Lage; Gomes, Matheus de Souza; Jeremias, Wander de Jesus; Cunha, Juliana Cecília; Oliveira, Guilherme Corrêa de; Botelho, Ana Cristina de Carvalho; Pimenta, Paulo Filemon Paolucci; Passos, Liana Konovaloff Jannotti; Cota, Renata Guerra de Sá; Babá, Élio Hideo
    Schistosoma mansoni is 1 of the causative agents of schistosomiasis, an endemic disease in 76 countries of the world. The study of its genome, estimated to be 270 Mb, is very important to understanding schistosome biology, the mechanisms of drug resistance, and immune evasion. Repetitive elements constitute more than 40% of the S. mansoni genome and may play a role in the parasite evolution. The retrotransposons Boudicca, a long terminal repeat (LTR), and Perere 03, a non-LTR, are present in a high number in the S. mansoni genome and were localized with the use of fluorescence in situ hybridization (FISH) and primed in situ labeling (PRINS). Bacterial artificial chromosomes (BAC) clones containing the retrotransposons Boudicca and Perere 03 were selected by bioinformatic analysis and used as probes in FISH. Using metaphase chromosomes from sporocysts and the FISH and PRINS techniques, we were able to map these retrotransposons. Perere 03 was localized in the euchromatic regions of the short arm of chromosome 2 and Boudicca in
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    Schistosomiasis in Nigeria : gleaning from the past to improve current efforts towards control.
    (2020) Oyeyemi, Oyetunde Timothy; Jeremias, Wander de Jesus; Grenfell, Rafaella Fortini Queiroz
    The effort to control schistosomiasis in Nigeria has been scaled up the past few years. Schistosomiasis affects all age groups, however, school children are at the highest risk of the disease. In the past years, global partners in schistosomiasis control have renewed their commitments. Many countries including few in Africa are working towards eliminating the disease. In Nigeria, the transmission of schistosomiasis is still active. This poses a serious health challenge as morbidity builds up in infected individuals. Mass drug administration (MDA) has helped to reduce morbidity but it is not adequate to abate transmission in many areas of the country. The integration of other aspects of control will provide a more sustainable result. This review attempted to discuss schistosomiasis transmission patterns in Nigeria in different eras. We identified some pitfalls in efforts towards the control of schistosomiasis in Nigeria. We recommended research priority in areas of neglect and advocated for integrated control.
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    Serological proteomic screening and evaluation of a recombinant egg antigen for the diagnosis of low-intensity Schistosoma mansoni infections in endemic area in Brazil.
    (2019) Moraes, Vanessa Silva; Shollenberger, Lisa Marie; Borges, William Castro; Rabello, Ana Lucia Teles; Harn, Donald A.; Medeiros, Lia Carolina Soares; Jeremias, Wander de Jesus; Siqueira, Liliane Maria Vidal; Pereira, Caroline Stephane Salviano; Pedrosa, Maria Luysa Camargos; Almeida, Nathalie Bonatti Franco; Almeida, Aureo; Lambertucci, Jose Roberto; Carneiro, Nídia Francisca de Figueiredo; Coelho, Paulo Marcos Zech; Grenfell, Rafaella Fortini Queiroz
    Background Despite decades of use of control programs, schistosomiasis remains a global public health problem. To further reduce prevalence and intensity of infection, or to achieve the goal of elimination in low-endemic areas, there needs to be better diagnostic tools to detect low- intensity infections in low-endemic areas in Brazil. The rationale for development of new diagnostic tools is that the current standard test Kato-Katz (KK) is not sensitive enough to detect low-intensity infections in low-endemic areas. In order to develop new diagnostic tools, we employed a proteomics approach to identify biomarkers associated with schisto- some-specific immune responses in hopes of developing sensitive and specific new meth- ods for immunodiagnosis. Methods and findings Immunoproteomic analyses were performed on egg extracts of Schistosoma mansoni using pooled sera from infected or non-infected individuals from a low-endemic area of Brazil. Cross reactivity with other soil-transmitted helminths (STH) was determined using pooled sera from individuals uniquely infected with different helminths. Using this approach, we identified 23 targets recognized by schistosome acute and chronic sera samples. To identify immunoreactive targets that were likely glycan epitopes, we compared these targets to the immunoreactivity of spots treated with sodium metaperiodate oxidation of egg extract. This treatment yielded 12/23 spots maintaining immunoreactivity, suggesting that they were protein epitopes. From these 12 spots, 11 spots cross-reacted with sera from individuals infected with other STH and 10 spots cross-reacted with the negative control group. Spot number 5 was exclusively immunoreactive with sera from S. mansoni-infected groups in native and deglycosylated conditions and corresponds to Major Egg Antigen (MEA). We expressed MEA as a recombinant protein and showed a similar recognition pattern to that of the native protein via western blot. IgG-ELISA gave a sensitivity of 87.10% and specificity of 89.09% represented by area under the ROC curve of 0.95. IgG-ELISA performed better than the conventional KK (2 slides), identifying 56/64 cases harboring 1–10 eggs per gram of feces that were undiagnosed by KK parasitological technique. Conclusions The serological proteome approach was able to identify a new diagnostic candidate. The recombinant egg antigen provided good performance in IgG-ELISA to detect individuals with extreme low-intensity infections (1 egg per gram of feces). Therefore, the IgG-ELISA using this newly identified recombinant MEA can be a useful tool combined with other techniques in low-endemic areas to determine the true prevalence of schistosome infection that is underestimated by the KK method. Further, to overcome the complexity of ELISA in the field, a second generation of antibody-based rapid diagnostic tests (RDT) can be developed.
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    Serological proteomic screening and evaluation of a recombinant egg antigen for the diagnosis of low-intensity Schistosoma mansoni infections in endemic area in Brazil.
    (2019) Moraes, Vanessa Silva; Shollenberger, Lisa Marie; Borges, William de Castro; Rabello, Ana Lúcia Teles; Harn, Donald A.; Medeiros, Lia Carolina Almeida Soares; Jeremias, Wander de Jesus; Siqueira, Liliane Maria Vidal; Pereira, Caroline Stephane Salviano; Pedrosa, Maria Luysa de Camargos; Almeida, Nathalie Bonatti Franco; Oliveira, Áureo Almeida de; Lambertucci, José Roberto; Carneiro, Nídia Francisca de Figueiredo; Coelho, Paulo Marcos Zech; Grenfell, Rafaella Fortini Queiroz
    Background: Despite decades of use of control programs, schistosomiasis remains a global public health problem. To further reduce prevalence and intensity of infection, or to achieve the goal of elimination in low-endemic areas, there needs to be better diagnostic tools to detect low-intensity infections in low-endemic areas in Brazil. The rationale for development of new diagnostic tools is that the current standard test Kato-Katz (KK) is not sensitive enough to detect low-intensity infections in low-endemic areas. In order to develop new diagnostic tools, we employed a proteomics approach to identify biomarkers associated with schistosome-specific immune responses in hopes of developing sensitive and specific new methods for immunodiagnosis. Methods and findings: Immunoproteomic analyses were performed on egg extracts of Schistosoma mansoni using pooled sera from infected or non-infected individuals from a low-endemic area of Brazil. Cross reactivity with other soil-transmitted helminths (STH) was determined using pooled sera from individuals uniquely infected with different helminths. Using this approach, we identified 23 targets recognized by schistosome acute and chronic sera samples. To identify immunoreactive targets that were likely glycan epitopes, we compared these targets to the immunoreactivity of spots treated with sodium metaperiodate oxidation of egg extract. This treatment yielded 12/23 spots maintaining immunoreactivity, suggesting that they were protein epitopes. From these 12 spots, 11 spots cross-reacted with sera from individuals infected with other STH and 10 spots cross-reacted with the negative control group. Spot number 5 was exclusively immunoreactive with sera from S. mansoni-infected groups in native and deglycosylated conditions and corresponds to Major Egg Antigen (MEA). We expressed MEA as a recombinant protein and showed a similar recognition pattern to that of the native protein via western blot. IgG-ELISA gave a sensitivity of 87.10% and specificity of 89.09% represented by area under the ROC curve of 0.95. IgG-ELISA performed better than the conventional KK (2 slides), identifying 56/64 cases harboring 1–10 eggs per gram of feces that were undiagnosed by KK parasitological technique. Conclusions: The serological proteome approach was able to identify a new diagnostic candidate. The recombinant egg antigen provided good performance in IgG-ELISA to detect individuals with extreme low-intensity infections (1 egg per gram of feces). Therefore, the IgG-ELISA using this newly identified recombinant MEA can be a useful tool combined with other techniques in low-endemic areas to determine the true prevalence of schistosome infection that is underestimated by the KK method. Further, to overcome the complexity of ELISA in the field, a second generation of antibody-based rapid diagnostic tests (RDT) can be developed.
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    Tetraspanin co029 expression as a tumor biomarker for monoclonal antibodies preparation : antigenic assessment in colorectal cancer cells.
    (2022) Coutinho, Lucelia; Corsini, Camila; Assis, Jessica; Pedrosa, Maria Luysa; Jeremias, Wander de Jesus; Santos, Viviane; Cabral, Monica; Mesquita, Ana Sofia; Viviani, Matheus; Rodrigues, Angelica Nogueira; Grenfell, Rafaella Fortini Queiroz
    Introduction: The identification of innovative cancer biomarkers is a very relevant ongoing quest. Moreover, their role in cancer diagnosis and clinical management has been radically changed in the last few years with the major emphasis on cancer molecular classification, therapeutic target identification, and therapeutic protocol responsivity. tetraspanins are a family of transmembrane proteins correlated with tumor stage, tumor type and patient out- come affecting cell growth, morphology, invasion, and metastasis. Methods: We expressed the 31kDa transmembrane human tetraspanin co029 antigen in Escherichia coli expression host cells using Gateway® platform. Western blotting and ELISA techniques, together with gene sequencing, confirmed the identity of TSP co029 recombinant protein. Forty clones producing antibodies against TSP co029 were obtained. These antibodies were incubated with human colorectal cancer cells in different conditions. ELISA and immunohistochemistry were also performed. Results: The expressed tetraspanin had an appropriate conformation and antigenic integrity to produce antibodies with affinity to the native TSP co029 biomarker. The affinity of the purified recombinant protein and antibodies were confirmed by western blotting, florescent staining of human colorectal cancer cells in fluorescence and confocal microscopies and by ELISA and immunohistochemistry. Conclusion: Our data showed that the recombinant protein and antibodies produced in this study allowed the confirmation of tetraspanin co029 protein presented on the surface of human colorectal cancer cells.