Análise bioquímica inicial do proteassoma em populações do Trypanosoma cruzi com diferentes fenótipos de resistência ao benzonidazol.

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dc.contributor.advisorCota, Renata Guerra de Sápt_BR
dc.contributor.authorLeal, Tiago Ferreira
dc.date.accessioned2013-04-05T11:59:13Z
dc.date.available2013-04-05T11:59:13Z
dc.date.issued2010
dc.description.abstractDiferenças na susceptibilidade ao benzonidazol (Bz) e nifurtimox (NFX) entre as populações do Trypanosoma cruzi podem explicar, pelo menos em parte, as diferenças na eficácia do tratamento da Doença de Chagas. O proteassoma tem um papel importante na degradação de proteínas normais, danificadas, mutadas, ou desnaturadas, incluindo a degradação de proteínas reguladoras das diversas vias celulares, tais como ciclo celular e apoptose e proteínas danificadas em resposta ao estresse. Este trabalho teve como objetivo geral analisar se o perfil de expressão e a taxa de proteólise intracelular dependente de proteassoma são afetados pelo fenótipo de resistência às drogas. Para isso, foram utilizadas populações de T. cruzi com o mesmo genótipo e resistência induzida in vitro (17WTS / 17LER) e in vivo (BZS / BZR), bem como diferentes genótipos, uma população susceptível (CL) e outra naturalmente resistente (Colombiana) ao benzonidazol. Inicialmente os níveis do proteassoma 20S, proteassoma símile HslV, PA700 e a PA26 foram avaliados por Western blot. Os resultados obtidos mostraram que não há efeito do fenótipo das cepas sobre a quantidade relativa tanto do proteassoma 20S, HslV, como dos seus reguladores. Posteriormente, as atividades peptidásicas do proteassoma 20S foram avaliadas utilizando-se substratos fluorogênicos. Foram observadas variações significativas na atividade semelhante à quimotripsina, tripsina, e caspase do proteassoma, sendo que somente a atividade semelhante à tripsina mostrou-se correlacionar com o fenótipo de resistência ao benzonidazol. Finalmente foi avaliada a taxa de proteólise intracelular nas mesmas populações, na presença de ATP, ATP e ubiquitina e ATP, ubiquitina e MG132, um inibidor clássico do proteassoma 20 e 26S. Os resultados obtidos sugerem que a adição de ubiquitina não induziu um aumento real na taxa de proteólise, além disso, observou-se um aumento real na proteólise após 90 minutos de indução na presença de ATP, sugerindo a coexistência de mecanismos de proteólise dependente de proteassoma e independente de ubiquitina. Para corroborar essa hipótese, foram avaliados os níveis de proteínas oxidadas e ubiquitinadas. Os resultados sugerem um perfil similar de proteína ubiquitinadas e diferencial para as oxidadas. Em conjunto, os resultados obtidos nesse trabalho sugerem que o steady state protéico em epimastigota é influenciado pela resistência a droga. Futuros experimentos serão realizados para determinar quais proteínas são os alvos naturais desta via metabólica.pt_BR
dc.description.abstractenDifferences in susceptibility to benznidazole (Bz) and nifurtimox (NFX) among populations of Trypanosoma cruzi may explain, at least in part, the differences in efficacy of treatment of Chagas disease. The proteasome has an important role in the degradation of normal proteins, damaged, mutated, or denatured, including the degradation of regulatory proteins of different cellular pathways such as cell cycle, apoptosis and damaged proteins in response to stress. This study intended to examine whether the expression profile and the rate of proteasome-dependent intracellular proteolysis are affected by the phenotype of drug resistance. For this, we used populations of T. cruzi with the same genotype and resistance induced in vitro (17WTS / 17LER) and in vivo (BZS / BZR) and populations with different genotypes, a susceptible (CL) and naturally resistant (Colombian) to benznidazole. Initially, the levels of 20S proteasome, proteasome-like HslV, PA700 and PA26 were analyzed by Western blot. The results showed no effect of the phenotype of the strains on the relative amount of both the 20S proteasome, HslV, and their regulators. Subsequently, the 20S proteasome peptidase activities were assessed using fluorogenic substrates. We observed significant variations in activity chymotrypsin-like, trypsin-like, and caspase-like of proteasome, and only the trypsin-like activity was shown to correlate with the phenotype of resistance to benznidazole. Finally we evaluated the rate of intracellular proteolysis in the same populations in the presence of ATP, ATP and ubiquitin and ATP ubiquitin and MG-132, a classic proteasome 20 and 26S inhibitor. The results suggest that the addition of ubiquitin did not induce a real increase in the rate of proteolysis, in addition, there was an real increase in proteolysis after 90 minutes of induction in the presence of ATP, suggesting the coexistence mechanisms of proteolysis proteasome-dependent and independent of ubiquitin. To corroborate this hypothesis, we assessed the levels of oxidized and ubiquitinated proteins. The results suggest a similar profile of ubiquitinated protein and differential for the oxidized. Together, the present results suggest that the steady state in epimastigote is influenced by drug resistance. Future experiments will be performed to determine which proteins are the natural targets of this pathway.
dc.identifier.citationLEAL, T. F. Análise bioquímica inicial do proteassoma em populações do Trypanosoma cruzi com diferentes fenótipos de resistência ao benzonidazol. 2010. 73 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2010.pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/2699
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.publisherPrograma de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.pt_BR
dc.subjectTrypanosoma cruzipt_BR
dc.subjectBenzonidazolpt_BR
dc.subjectProteassomapt_BR
dc.subjectDrogas - resistênciapt_BR
dc.titleAnálise bioquímica inicial do proteassoma em populações do Trypanosoma cruzi com diferentes fenótipos de resistência ao benzonidazol.pt_BR
dc.typeDissertacaopt_BR
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