Imunogenicidade de três frações antigênicas de Leishmania amazonensis como candidatos vacinais avaliados em hamster contra leishmaniose visceral.

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dc.contributor.advisorGiunchetti, Rodolfo Cordeiropt_BR
dc.contributor.authorAmorim, Danielle Rodrigues de
dc.contributor.refereeGiunchetti, Rodolfo Cordeiropt_BR
dc.contributor.refereeEstanislau, Juliana de Assis Silva Gomespt_BR
dc.contributor.refereeMosqueira, Vanessa Carla Furtadopt_BR
dc.date.accessioned2017-05-08T14:56:55Z
dc.date.available2017-05-08T14:56:55Z
dc.date.issued2015
dc.descriptionPrograma de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.pt_BR
dc.description.abstractA Leishmaniose é um conjunto de síndromes complexas e multifacetadas causadas por espécies de protozoários do gênero Leishmania, sendo transmitida através da picada de flebotomíneos infectados. Endêmica em 88 países do mundo estima-se que cerca de 350 milhões de pessoas estão em risco de contrair a doença, e aproximadamente 12 a 14 milhões estão infectadas. Cerca de 500 mil pessoas desenvolvem a forma visceral da doença, sendo que 90% dos casos ocorrem na Índia, Bangladesh, Nepal, Sudão, e no Brasil. Diversos pesquisadores no mundo tem buscado respostas para a prevenção da leishmaniose visceral canina (LVC), através da caracterização de antígenos de espécies de Leishmania, já que o cão é considerado o reservatório doméstico do parasito e um importante elo na cadeia epidemiológica de transmissão da doença. Ainda não existe uma vacina que apresente eficácia vacinal compatível para o controle da LVC e que seja recomendada pelo Ministério da Saúde de nosso país como medida profilática da doença. Considerando o hamster amplamente utilizado como modelo experimental em ensaios vacinais com diversos protocolos anti-Leishmania, estabelecemos uma plataforma para testes rápidos in vivo buscando avaliar simultaneamente diferentes candidatos vacinais. Neste sentido, o presente projeto propôs a avaliação de um ensaio pré-clínico vacinal, em hamsters Mesocricetusauratus, considerando aspectos relacionados à inocuidade, toxicidade e imunogenicidade dos candidatos contra leishmaniose visceral, entre os quais: (i) grupo inoculado com salina 0,85% estéril, (ii) grupo inoculado com adjuvante saponina, (iii) grupo inoculado com antígeno bruto de Leishmania amazonensis(LA), (iv)grupo inoculado comantígeno solúvel de L. amazonensis(LASol), (v) grupo inoculado com antígeno particulado de L. amazonensis (LAPart), (vi) grupo inoculado com antígeno bruto de L. amazonensis associado a saponina (LASap), (vii) grupo inoculado com antígeno solúvel de L. amazonensis associado a saponina (LASapSol)e (viii)grupo inoculado comantígeno particulado de L. amazonensis associado a saponina (LASapPart). Os resultados mostraram que nenhuma das formulações vacinais induziu alterações no local do inóculo ou alterações sistêmicas avaliadas pela inspeção clínica e pelo hemograma. Deste modo, ficou constatado que as diferentes formulações vacinais não induziram hemólise ou anemia nos diferentes grupos avaliados. A análise do leucograma revelou linfocitose restrita apenas aos grupos que receberam antígenos vacinais associados ou não ao adjuvante saponina. De forma semelhante, a análise de antigenicidade revelou aumento dos níveis de IgG total anti-Leishmania, acima do cut-off, nos mesmos grupos que apresentaram linfocitose. A análise do immunoblotting, realizada nas formulações em que foi associado antígeno ao adjuvante saponina (LASap, LASapSol, LASapPart), demonstrou a presença de três bandas imunogênicas com peso molecular próximas de 40 kDa, 30 kDa e bandas entre 20 e 30 kDa. As proteínas encontradas nesse trabalho abrem perspectivas para a análise de novas formulações vacinais contra a leishmaniose visceral.pt_BR
dc.description.abstractenLeishmaniasis is a set of complex and multifaceted syndromes caused by species of protozoa of the genus Leishmania and is transmitted through the bite of infected sandfly. Endemic in 88 countries of the world it is estimated that about 350 million people are at risk of contracting the disease, and about from 12 to 14 million are infected. About 500,000 people develop the visceral form of the disease, with 90% of cases occur in India, Bangladesh, Nepal, Sudan and Brazil. Several researchers in the world have sought answers for the prevention of canine visceral leishmaniasis (CVL), through the characterization of Leishmania species antigens, as the dog is considered the domestic reservoir of the parasite and an important link in the epidemiological chain of transmission. Although there is no vaccine to present vaccine efficacy compatible for control of LVC and is recommended by the Ministry of Health of our country as a prophylactic measure of the disease. Considering the hamster widely used as an experimental model in vaccine testing with several anti-Leishmania protocols, we have established a platform for rapid in vivo testing to simultaneously evaluate different vaccine candidates. In this sense, this project proposed the evaluation of a vaccine pre-clinical trial, in hamsters Golden Hamster, considering aspects related to safety, toxicity and immunogenicity of the candidates against visceral leishmaniasis, including: (i) the group inoculated with saline sterile 0,85%, (ii) the group inoculated with saponin adjuvant, (iii) the group inoculated with crude antigen of Leishmania amazonensis (LA), (iv) the group inoculated with soluble antigen of L. amazonensis (LASol), (v) the group inoculated with particulate antigen L. amazonensis (LaPart), (vi) the group inoculated with crude antigen of L. amazonensis associated with saponin (LASap), (vii) the group inoculated with soluble antigen associated with L. amazonensis saponin (LASapSol) and (viii) group inoculated with particulate antigen L. amazonensis associated with saponin (LASapPart). The results showed that none of the vaccine formulations induced changes in the inoculum local or systemic abnormalities assessed by clinical inspection and the CBC. Thus it was found that different vaccine formulations did not induce hemolysis or anemia in the different study groups. Analysis of the white blood cell count revealed lymphocytosis restricted to the groups that received vaccine antigens associated or not with saponin adjuvant. Similarly, antigenicity analysis revealed increased levels of total IgG anti-Leishmania, above the cut-off, the same groups showed lymphocytosis. The analysis of immunoblotting performed in formulations wherein the antigen is associated to the saponin adjuvant (LASap, LASapSol, LASapPart) showed the presence of three bands with molecular weight immunogenic next 40kDa, 30kDa and bands between 20 and 30 kDa. The proteins found in this work open up prospects for the analysis of new vaccine formulations against visceral leishmaniasis.pt_BR
dc.identifier.citationAMORIM, Danielle Rodrigues de. Imunogenicidade de três frações antigênicas de Leishmania amazonensis como candidatos vacinais avaliados em hamster contra leishmaniose visceral. 2015. 65 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) – Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2015.pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/7673
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.rightsabertopt_BR
dc.rights.licenseAutorização concedida ao Repositório Institucional da UFOP pelo(a) autor(a) em 18/04/2016 com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0 que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho desde que sejam citados o autor e o licenciante. Não permite o uso para fins comerciais nem a adaptação.pt_BR
dc.subjectVacinaspt_BR
dc.subjectAntígenospt_BR
dc.titleImunogenicidade de três frações antigênicas de Leishmania amazonensis como candidatos vacinais avaliados em hamster contra leishmaniose visceral.pt_BR
dc.typeDissertacaopt_BR
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