Fietto, Juliana Lopes RangelSantos, Ramon de Freitas2015-01-152015-01-152008SANTOS, R. de F. Caracterização e avaliação da atividade ectonucleotidásica do Trypanosoma cruzi e sua relação com a infectividade in vitro. 2008. 132 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2008.http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/4210Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.Neste trabalho foi avaliada a participação de ecto-nucleotidases, especialmente da família ENTPDase, na infecção in vitro pelo Trypanosoma cruzi. Foi demonstrado que diferentes cepas/clone apresentam atividade ecto-nucleotídásica diversa, porém, as formas tripomastigotas mantém maior hidrólise de ATP. Adicionalmente, utilizando a cepa Y, que apresentou a maior polaridade entre hidrólise de ATP e ADP, definimos uma cinética de atividade ecto-nucleotidásica sobre nucleotídeos de adenina durante a manutenção do ciclo celular (passagens) em células VERO. Nas passagens celulares as formas tripomastigotas apresentaram as maiores atividades ecto-ATPásicas e uma tendência à diminuição da relação de hidrólise ATP/ADP com o aumento do número de passagens. Na terceira passagem poucos parasitos foram capazes de internalizar, originando parasitos de P4, com perfil de hidrólise similar aos parasitos das passagens anteriores. A maioria dos parasitos que não internalizaram se diferenciaram em formas arredondadas do tipo amastigotas e apresentaram uma reduzida razão de hidrólise ATP/ADP, semelhante aos amastigotas derivados de tripomastigotas de P1 e P3. Estes dados sugerem que a diminuição da relação ATPase/ADPase seja um fator que de algum modo impede a internalização dos parasitos, induzindo à sua diferenciação e diminuição da infectividade. O uso dos inibidores de apirases como, Suramina, ARL67156 e GdCl3 levou ao bloqueio parcial da atividade ecto-ATPásica e ecto-ADPásica, nos parasitos vivos e na NTPDase-I recombinante purificada, e foram capazes de inibir a infecção em células VERO até o máximo de 78%. A infectividade in vitro também foi inibida pelo tratamento com antisoro anti-NTPDase-I, entretanto, este não se mostrou capaz de bloquear significativamente a hidrólise de ATP e ADP, sugerindo que esta proteína possa ter outras funções que afetam a infectividade além da regulação da concentração de nucleotídeos extracelulares, como, por exemplo, participação na adesão celular. Nossos dados, de maneira geral, indicam a participação das E-NTPDases e da NTPDase-I no processo infectivo e sugerem fortemente que o bloqueio da sinalização dependente destes parece ser realmente um bom alvo para a quimioterapia e possivelmente para imunização. Assim, a inibição do metabolismo extracelular de nucleotídeos de adenina surge agora efetivamente como um novo alvo para o bloqueio da infecção pelo T. cruzi.pt-BRInfectividade in vitroDissertacaoA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Autorizo a UFOP – Universidade Federal de Ouro Preto – a disponibilizar gratuitamente, sem ressarcimento dos direitos autorais, o texto integral da publicação supracitada, de minha autoria, em meio eletrônico, na BDTD – Biblioteca Digital de Teses e Dissertações, no formato especificado, para fins de leitura, impressão e/ou download pela Internet, a título de divulgação da produção científica gerada pela Universidade a partir desta data.