CIPHARMA - Doutorado (Teses)

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Browsing CIPHARMA - Doutorado (Teses) by Author "Carvalho, Andréa Teixeira de"

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    Avaliação do perfil imunológico em pacientes com tuberculose pulmonar ativa.
    (2017) Papini, Tatiane Figueiredo de Morais; Carneiro, Cláudia Martins; Carvalho, Andréa Teixeira de; Carneiro, Cláudia Martins; Pascoal, Vanessa Peruhype Magalhães; Araújo, Márcio Sobreira Silva; Rezende, Simone Aparecida; Silva, Breno de Mello
    Apesar da identificação do bacilo Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) a mais de um século por Robert Koch e do desenvolvimento da vacina contendo o Baccile Calmette-Gérin (BCG), a tuberculose, doença tratável e curável, ainda é um sério problema de saúde pública no Brasil e no mundo. Compreender o comportamento do sistema imune do hospedeiro, durante a infecção pelo M. tuberculosis, é fundamental para o desenvolvimento de novos métodos diagnósticos, fármacos e vacinas, o que permitirá salvar milhares de vida. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o perfil imunológico de indivíduos com diagnóstico bacteriológico de tuberculose pulmonar (Tb, n=105), em comparação a controles saudáveis (Co, n=107). Além disso, relacionou o status imunológico e a extensão da lesão pulmonar, classificada em unilateral (Uni) e bilateral (Bi), após análise das radiografias de tórax dos indivíduos do grupo Tb. População, Material e Métodos: O perfil fenotípico e funcional de leucócitos circulantes (imunidade inata e adaptativa) de indivíduos dos grupos Tb e Co foram examinados por ensaios de imunofenotipagem ex vivo e cultura de curta duração, in vitro, de sangue total com antígenos de M. tuberculosis, empregando citometria de fluxo. Adicionalmente, determinou-se a concentração de biomarcadores solúveis (quimiocinas, fatores de crescimento e citocinas), além do estabelecimento de assinaturas e redes de conexões que permitiriam a distinção entre indivíduos com tuberculose pulmonar e controles. Resultados: O grupo Tb, comparado ao Co, apresentou perfil alterado de leucócitos circulantes com contagens, significativamente menores, de células NK, células CD3+CD56+CD16+/-, linfócitos T CD4+ e linfócitos B CD19+. Além disso, observou-se aumento na capacidade migratória e ativação celular dos linfócitos T CD4+/ CD8+, através da regulação positiva dos marcadores de ativação celular (HLA-DR) e receptores de quimiocinas (CCR2, CCR3 e CXCR4) e molécula de adesão (CD18). Adicionalmente, o grupo Tb apresentou redução na frequência dos monocitos CD14LowCD16+, que encontravam-se mais ativados durante a infecção. Em relação à gravidade da doença, no grupo Bi, observou-se redução na frequência de linfócitos B CD19+CD5+ e expressão de HLA-DR nos monócitos CD14LowCD16+. Adicionalmente, no grupo Bi, as frequências de linfócitos T CD4+IL-17+ e linfócitos T CD8+IL-17+ foram significativamente maiores. Estes dados sugerem que a IL-17 possa ter um papel deletério na tuberculose pulmonar, enquanto a IL-4, ação protetora. Em relação aos biomarcadores solúveis, observou-se que o grupo Tb, em relação ao Co, apresentou aumentos significativos nas concentrações de quimiocinas (CXCL8, CCL5 e CXCL10) fatores de crescimento (PDGFBB, VEGF e G-CFS), citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-6, IL12p70, IFN-γ, IL-17) e citocinas reguladoras (IL-ra, IL-4 e IL-10). Em relação à gravidade da doença, observou-se aumentos nas concentrações dos biomarcadores solúveis CXCL8 e IL-6 no grupo Bi, quando comparado ao Uni. A análise dos sistemas biológicos revelou assinatura diferenciada entre os grupos Tb e Co, sendo o grupo Tb caracterizado por resposta imune intensa. Conclusão: Os resultados demonstram que, durante a tuberculose pulmonar ativa, ocorrem alterações sistêmicas nos componentes da imunidade inata e adaptativa do hospedeiro e que a extensão das lesões pulmonares relaciona-se com o microambiente diferenciado gerado pela resposta imune.
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    Do leishflow ao leishplex : inovações tecnológicas da sorologia por citometria de fluxo aplicada ao diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina.
    (2016) Ker, Henrique Gama; Reis, Alexandre Barbosa; Carvalho, Andréa Teixeira de; Reis, Alexandre Barbosa; Pascoal, Vanessa Peruhype Magalhães; Silva, Eduardo Sérgio da; Veloso, Vanja Maria; Silva, Glenda Nicioli da
    Os ensaios sorológicos para Leishmania são determinantes para indicar a eutanásia de cães como medida de controle da Leishmaniose Visceral no Brasil. No presente estudo, buscou-se avaliar o desempenho das metodologias sorológicas que atualmente são – e os que já foram – adotadas pelo Ministério da Saúde do Brasil (DPP, ELISA e RIFI), assim como o da sorologia por Citometria de Fluxo (CF), no diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC). Os ensaios foram conduzidos em uma ampla variedade de amostras de soro, que incluiu cães naturalmente infectados por Leishmania infantum portadores de diferentes formas clínicas, cães infectados com outras protozooses caninas (L. braziliensis, Trypanosoma cruzi, Ehrlichia canis e Babesia canis) e cães vacinados contra LVC (Leishmune®, Leish-Tec® e LBSap). Em relação aos testes oficiais, o principal achado se deu pela elevada especificidade do DPP (99,4%) em relação à ELISA (89,9%) e RIFI (75,2%). Quanto ao teste LeishFlow, destacou-se a sensibilidade de 95,0% tanto nos cães assintomáticos, quanto nos oligossintomáticos e sintomáticos. A especificidade do LeishFlow em amostras de soro de cães infectados por L. braziliensis foi de 80,0%, 55,6% nas amostras de T. cruzi, 93,3% em E. canis, e 100,0% em B. canis. Nos cães vacinados pela Leishmune®, Leish-Tec® e LBSap observou-se 100,0% de especificidade. A sequência do trabalho buscou o desenvolvimento de uma inovação metodológica na sorologia por CF por meio do acoplamento de antígenos recombinantes à microesferas de poliestireno. Os antígenos multiepitopo PQ20 e C1, e os recombinantes rLci1A e rLci2B foram acoplados a diferentes microesferas, formando os sistemas antigênicos microesfera–proteína C6–PQ20, E7–C1, A4–rLci1A, e E4–rLci2B. Constatou-se que os sistemas A4−rLci1A e E4−rLci2B foram os únicos que se mostraram adequadamente funcionais para a pesquisa de anticorpos caninos IgG. O ensaio sorológico pelo sistema A4−rLci1A apresentou sensibilidade de 85,0% nos cães assintomáticos, e 95,0% nos oligossintomáticos e sintomáticos. A especificidade deste sistema nos cães infectados por L. braziliensis foi de 100,0%, enquanto que nas infecções por E. canis e B. canis, esse valor foi de 30,0% e 20,0% respectivamente. Nos cães vacinados por Leishmune® e Leish-Tec® a especificidade foi de 70,0%, e por LBSap de 80,0%. O sistema antigênico E4−rLci2B, por sua vez, apresentou sensibilidade de 85,0% nos animais assintomáticos, e de 100,0% nos oligossintomáticos e sintomáticos. A especificidade deste sistema em relação as infecções por L. braziliensis e E. canis foi de 80,0%, e de 60,0% quanto a infecção por B. canis. A especificidade relacionada à vacinação por Leishmune® e pela Leish-Tec® foi de 90,0%, e na LBSap foi de 50,0%. A combinação dos sistemas A4−rLci1A e E4−rLci2B para o ensaio sorológico único, LeishPlex, apresentou sensibilidade de 85,0% nos cães assintomáticos, e 100,0% nos grupos oligossintomático e sintomático. A especificidade em cães infectados por L. braziliensis foi de 100,0%, enquanto que em E. canis foi de 70,0%, e em B. canis foi 60,0%. Nos cães vacinados pela Leishmune®, Leish-Tec® e LBSap observou-se 100,0% de especificidade. Portanto, a inovação LeishPlex resultou em uma elevação da precisão geral de acertos. O conjunto de dados evidenciados no presente trabalho fortalecem a sorologia por CF como uma importante abordagem para o diagnóstico sorológico da LVC.