Browsing by Author "Pinto, Priscila de Faria"

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    An antigenic domain within a catalytically active leishmania infantum nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (NTPDase 1) is a target of inhibitory antibodies.
    (2013) Maia, Ana Carolina Ribeiro Gomes; Porcino, Gabriane Nascimento; Detoni, Michelle de Lima; Emídio, Nayara Braga; Marconato, Danielle Gomes; Pinto, Priscila de Faria; Fessel, Melissa Regina; Reis, Alexandre Barbosa; Juliano Neto, Luiz; Juliano, Maria Aparecida; Marques, Marcos José; Vasconcelos, Eveline Gomes
    Weidentified a shared B domainwithin nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (NTPDases) of plants and parasites. Now, an NTPDase activity not affected by inhibitors of adenylate kinase and ATPases was detected in Leishmania infantum promastigotes. By non-denaturing gel electrophoresis of detergent-homogenized promastigote preparation, an active band hydrolyzing nucleosides di- and triphosphate was visualized and, following SDS-PAGE and silver staining was identified as a single polypeptide of 50 kDa. By Western blots, it was recognized by immune sera raised against potato apyrase (SA), r-pot B domain (SB), a recombinant polypeptide derived fromthe potato apyrase, and LbB1LJ (SC) or LbB2LJ (SD), synthetic peptides derived fromthe Leishmania NTPDase 1, and by serum samples from dogs with visceral leishmaniasis, identifying the antigenic L. infantum NTPDase 1 and, also, its conserved B domain (r83–122). By immunoprecipitation assays andWestern blots, immune sera SA and SB identified the catalytically active NTPDase 1 in promastigote preparation. In addition, the immune sera SB (44%) and SC or SD (87–99%) inhibited its activity, suggesting a direct effect on the B domain. By ELISA, 37%, 45% or 50% of 38 infected dogs were seropositive for r-pot B domain, LbB1LJ and LbB2LJ, respectively, confirming the B domain antigenicity.
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    A expressão de RNAm de SmATPDase 1 E SmATPDase 2 em ovos de Schistosoma mansoni modula, via il-10 : o sistema imune de indivíduos infectados.
    (2020) Gomides, Thalisson Artur Ribeiro; Afonso, Luís Carlos Crocco; Carvalho, Andréa Teixeira de; Leite, Pauline Martins; Pinto, Priscila de Faria; Fietto, Juliana Lopes Rangel; Vieira, Paula Melo de Abreu; Lima, Wanderson Geraldo de; Carvalho, Andréa Teixeira de; Leite, Pauline Martins; Afonso, Luís Carlos Crocco
    A esquistossomose é uma doença crônica e debilitante que afeta mais de 200 milhões de pessoas em todo o mundo. A formação de granulomas ao redor dos ovos do parasito é mediada por células T CD4 +, e estudos recentes forneceram informações sobre a cascata de citocinas que controla o desenvolvimento da doença. A citocina IL-10 apresenta um papel central na regulação das respostas Th1 e Th2 frente aos antígenos do schistossoma, inibindo a expressão de moléculas co-estimuladoras, contribuindo para o estabelecimento do parasito. As SmATPDases degradam os nucleotídeos extacelulares ATP e ADP em AMP e podem inibir a inflamação mediada por ATP e a trombose mediada por ADP. Hidrólise adicional do AMP gera adenosina, uma molécula com propriedades antiinflamatórias. Essa ação pode modular a resposta imune do hospedeiro e favorecer a sobrevivência do parasito. Neste trabalho, avaliamos a expressão das enzimas SmATPDase 1 e SmATPDase 2 em ovos de S. mansoni obtidos de indivíduos infectados como um possível fator relacionado ao parasito que pode influenciar a resposta imune do hospedeiro e, consequentemente, o desfecho clínico da doença. Amostras de fezes foram coletadas de 39 indivíduos infectados para detectar regiões codificantes das enzimas pela qPCR. A produção de citocinas foi medida em sobrenadantes de culturas de PBMC estimuladas com SEA por ensaio multiplex. A determinação da mediana global de cada citocina foi realizada para caracterização dos indivíduos em altos produtores (AP) de citocinas (indivíduos que apresentaram índices de citocinas acima da mediana global). Observou-se que 6 indivíduos expressaram SmATPDase1 em suas amostras fecais, 6 expressaram SmATPDase2 e 6 expressaram ambas as enzimas. O grupo que expressou apenas a SmATPDase1 apresentou alta frequência de AP para IFN-γ, TNF e IL-4 e baixa frequência de AP para IL-6. O grupo que expressou apenas a SmATPDase2 apresentou alta frequência de AP para IFN-γ, IL-6 e IL-4 e baixa frequência de AP para IL-10. O grupo que expressou ambas enzimas apresentou alta frequência de AP para IL-10 e baixas frequências de AP para IFN-γ, IL-6, IL-2, IL-4 e IL-13. Ao comparar a razão entre IL10/IFN-γ após estímulo com SEA, observou-se que a expressão de ambas as enzimas modula a produção de IFN-γ através da ação da citocina IL-10. Curiosamente, a expressão de SmATPDases contribuiu para a associação positiva entre a intensidade da infecção e o índice de IL-10, uma vez que a correlação positiva entre a intensidade da infecção e os níveis de IL-10 ocorreu apenas no grupo SmATPDase positivo. O gráfico de radar revelou que 62,5% das citocinas analisadas apresentaram frequência reduzida no grupo de indivíduos que expressam ambas enzimas, enquanto a IL-10 manteve uma frequência de altos produtores acima de 50%. Além disso, a análise do diagrama de Venn mostrou que a IL-10 é a única citocina induzida pela expressão de ambas as enzimas ao mesmo tempo. Finalmente, a expressão de SmATPDases em amostras de fezes mostrou-se relevante para o agrupamento de indivíduos junto a dados sociodemográficos, parasitológicos e imunológicos. Assim, a expressão de ambas as enzimas em ovos do parasito parece ser um novo fator, ainda não descrito, capaz de modular negativamente a resposta imune do hospedeiro, através da produção de IL-10 o que pode contribuir para a sobrevivência do parasito.
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    Leishmania infantum nucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 (NTPDase 1) B-domain : antibody antiproliferative effect on the promastigotes and IgG subclass responses in canine visceral leishmaniasis.
    (2019) Maia, Ana Carolina Ribeiro Gomes; Porcino, Gabriane Nascimento; Pinto, Priscila de Faria; Mendes, Túlio Vieira; Antinarelli, Luciana Maria Ribeiro; Coimbra, Elaine Soares; Reis, Alexandre Barbosa; Juliano Neto, Luiz; Juliano, Maria Aparecida; Marques, Marcos José; Vasconcelos, Eveline Gomes
    A nucleoside triphosphate diphosphohydrolase-1 (NTPDase 1) was identified on the surface, flagellum and kinetoplast from L. infantum promastigotes by immunocytochemistry and confocal laser scanning microscopy, using immune sera that recognized specifically the B domain of NTPDase 1 and produced against synthetic peptides (LbB1LJ and LbB2LJ) derived from this domain. The polyclonal antibodies had effective antileishmanial effect, reducing significantly in vitro promastigotes growth (21–25%), an antiproliferative effect also demonstrated by immune sera produced against recombinant r-pot B domain, and two other synthetic peptides (potB1LJ and potB2LJ). In addition, using these biomolecules in ELISA technique, IgG1 and IgG2 subclasses reactivities of either healthy dogs or infected by L. infantum and classified clinically as asymptomatic, oligosymptomatic and symptomatic were tested. Analysis of distinct IgG1 and IgG2 seropositivities patterns suggested antibody subclasses binding epitopes along B domain for protection against infection, indicating this domain as a new tool for prophylactic and immunotherapeutic investigations.
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    Screening of plant derived chalcones on the inhibition of potato apyrase : potential protein biotechnological applications in health.
    (2020) Farani, Priscila Silva Grijó; Detoni, Michelle de Lima; Emídio, Nayara Braga; Pereira, Vinícius R. D.; Alves Júnior, Ismael José; Silveira, Lígia S. da; Couri, Mara R. C.; Vasconcelos, Eveline Gomes; Borges, William de Castro; Silva Filho, Ademar Alves; Pinto, Priscila de Faria
    NTPDases (EC 3.6.1.5) are enzymes belonging to a protein family which have as a common feature the ability to hydrolyze di- and triphosphate nucleotides (ADP and ATP) to monophosphate nucleosides (AMP) in the presence of Ca+2 and Mg+. The potato apyrase has been the first protein of the NTPDase family to be purified. In mammals, these enzymes are involved in physiologic and sick processes as thromboregulation, inflammatory and immunologic responses. In this study, we investigated the in vitro potential of synthetic chalcones on the inhibition of potato apyrase purified from Solanum tuberosum. The protein was purified with high grade purity and its identity was confirmed by electrophoresis, western blot, and LC-MS/MS. Five out of the eight chemically synthetized chalcones analyzed in this study showed significant inhibition of the apyrase activity. The compound with the best rate of inhibition of ATP hydrolytic activity was able to promote 54% inhibition with a concentration of 3.125 μM. Ticlopidine, used as an inhibition drug control, was able to promote inhibitions around 50% of the activity (IC50 = 2.167 μM). Our results with the potato apyrase inhibition with the synthetic chalcones suggest that these compounds may use as potential lead candidates for the treatment of some diseases associated with nucleotides.