Perfil de mediadores inflamatórios produzido por células da linhagem J774 após estímulo in vitro com a IL-33 e antígeno/parasito o Trypanosoma cruzi.
No Thumbnail Available
Date
2020
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Na infecção pelo protozoário Trypanosoma cruzi, citocinas de perfil inflamatório
exercem importante papel na imunopatogênese, enquanto outras apresentam suas ações
ainda incertas, como é o caso da interleucina (IL)-33. O objetivo deste estudo é avaliar o
perfil de resposta inflamatória induzido por células de cultura estimuladas com a IL-33 e
com o T. cruzi (parasito vivo e antígenos – Ags). Na etapa I, Ags obtidos de parasitos da
cepa Y do T. cruzi em diferentes concentrações (0; 12,5; 25; 50; 100 e 200 µg/mL) foram
utilizados para estimular células da linhagem J774, após 24h, sendo o sobrenadante
coletado para a dosagem do TNF (fator de necrose tumoral) por imunoensaio enzimático
(ELISA). Assim, a dose selecionada foi a de 100µg para estimular as células. Na etapa II,
realizou-se o cultivo de células J774 adicionando 5x105 células/poço para o estímulo com
antígeno. Na etapa III foram plaqueadas cerca de 1,25x105
células/poço utilizando1x106
formas tripomastigotas metaciclícas do T. cruzi como estímulo. Os estímulos seguiram o
seguinte padrão: (i) cultura sem IL-33 e sem antígeno/T. cruzi; (ii) cultura com IL-33 (10
ng/ml) e sem antígeno/T. cruzi; (iii) cultura sem IL-33 com antígeno (100µg/mL) e T.
cruzi; (iv) cultura com IL-33 (10ng/ml) e com antígeno (100µg/mL) e T. cruzi. As culturas
foram avaliadas em diferentes tempos após os estímulos, sendo eles 0h, 24h e 48h e os
sobrenadantes coletados para dosagem dos mediadores inflamatórios: TNF, IL-17
(interleucina 17), CCL2 (ligante 2 da quimiocina do grupo CC), IL-10 (interleucina 10),
dosagem de nitrito pelo método de Griess e contagem de amastigotas. Observou-se
diferenças na produção do TNF, IL-17, CCL2 para os grupos estimulados pelo antígeno
ou pelo T. cruzi nos tempos de 24h e 48h. Para a citocina IL-10, essas diferenças foram
observadas apenas nos grupos estimulados com o T. cruzi. Em relação ao nitrito,
observou-se diferenças nos grupos estimulados com Ag ou T. cruzi paras os tempos 0h,
24h e 48h. O número de formas amastigotas foi maior nas células estimuladas com a
citocina IL-33. De forma geral, tanto o antígeno quanto o T. cruzi vivo, induziu a
produção de mediadores inflamatórios nas células J774 com 24h ou de 48h. A IL-33
mostrou-se importante nos eventos iniciais da infecção tanto em células estimuladas com
o Ag quanto com o parasito vivo, bem como no controle da citocina IL-10 nos grupos
infectados. Dessa forma, concluímos que a citocina IL-33 durante a infecção in vitro pelo
T. cruzi, em cultura de células J774, participa na produção de mediadores inflamatórios e
regulatórios.
Description
Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.
Keywords
Citocinas, Trypanosoma cruzi, Células
Citation
OLIVEIRA, Daniela Silva de. Perfil de mediadores inflamatórios produzido por células da linhagem J774 após estímulo in vitro com a IL-33 e antígeno/parasito o Trypanosoma cruzi. 2020. 90 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2020.