Perfil de mediadores inflamatórios produzido por células da linhagem J774 após estímulo in vitro com a IL-33 e antígeno/parasito o Trypanosoma cruzi.

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dc.contributor.advisorSilva, André Talvani Pedrosa dapt_BR
dc.contributor.advisorPerucci, Luiza Oliveirapt_BR
dc.contributor.authorOliveira, Daniela Silva de
dc.contributor.refereeSilva, André Talvani Pedrosa dapt_BR
dc.contributor.refereePerucci, Luiza Oliveirapt_BR
dc.contributor.refereeEstanislau, Juliana de Assis Silva Gomespt_BR
dc.contributor.refereeIsoldi, Mauro Césarpt_BR
dc.date.accessioned2020-08-07T15:46:13Z
dc.date.available2020-08-07T15:46:13Z
dc.date.issued2020
dc.descriptionPrograma de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.pt_BR
dc.description.abstractNa infecção pelo protozoário Trypanosoma cruzi, citocinas de perfil inflamatório exercem importante papel na imunopatogênese, enquanto outras apresentam suas ações ainda incertas, como é o caso da interleucina (IL)-33. O objetivo deste estudo é avaliar o perfil de resposta inflamatória induzido por células de cultura estimuladas com a IL-33 e com o T. cruzi (parasito vivo e antígenos – Ags). Na etapa I, Ags obtidos de parasitos da cepa Y do T. cruzi em diferentes concentrações (0; 12,5; 25; 50; 100 e 200 µg/mL) foram utilizados para estimular células da linhagem J774, após 24h, sendo o sobrenadante coletado para a dosagem do TNF (fator de necrose tumoral) por imunoensaio enzimático (ELISA). Assim, a dose selecionada foi a de 100µg para estimular as células. Na etapa II, realizou-se o cultivo de células J774 adicionando 5x105 células/poço para o estímulo com antígeno. Na etapa III foram plaqueadas cerca de 1,25x105 células/poço utilizando1x106 formas tripomastigotas metaciclícas do T. cruzi como estímulo. Os estímulos seguiram o seguinte padrão: (i) cultura sem IL-33 e sem antígeno/T. cruzi; (ii) cultura com IL-33 (10 ng/ml) e sem antígeno/T. cruzi; (iii) cultura sem IL-33 com antígeno (100µg/mL) e T. cruzi; (iv) cultura com IL-33 (10ng/ml) e com antígeno (100µg/mL) e T. cruzi. As culturas foram avaliadas em diferentes tempos após os estímulos, sendo eles 0h, 24h e 48h e os sobrenadantes coletados para dosagem dos mediadores inflamatórios: TNF, IL-17 (interleucina 17), CCL2 (ligante 2 da quimiocina do grupo CC), IL-10 (interleucina 10), dosagem de nitrito pelo método de Griess e contagem de amastigotas. Observou-se diferenças na produção do TNF, IL-17, CCL2 para os grupos estimulados pelo antígeno ou pelo T. cruzi nos tempos de 24h e 48h. Para a citocina IL-10, essas diferenças foram observadas apenas nos grupos estimulados com o T. cruzi. Em relação ao nitrito, observou-se diferenças nos grupos estimulados com Ag ou T. cruzi paras os tempos 0h, 24h e 48h. O número de formas amastigotas foi maior nas células estimuladas com a citocina IL-33. De forma geral, tanto o antígeno quanto o T. cruzi vivo, induziu a produção de mediadores inflamatórios nas células J774 com 24h ou de 48h. A IL-33 mostrou-se importante nos eventos iniciais da infecção tanto em células estimuladas com o Ag quanto com o parasito vivo, bem como no controle da citocina IL-10 nos grupos infectados. Dessa forma, concluímos que a citocina IL-33 durante a infecção in vitro pelo T. cruzi, em cultura de células J774, participa na produção de mediadores inflamatórios e regulatórios.pt_BR
dc.description.abstractenIn the Trypanosoma cruzi infection, the inflammatory cytokines play an important role in the immunopathogenesis, while other cytokines have their actions still uncertain, such as the IL-33. The aim of this study is to evaluate the inflammatory response profile induced by the cultured cells stimulated with IL-33 and T. cruzi (live parasites and total antigen - Ag). In step I, Ags obtained from T. cruzi, Y strain, in different concentrations (0; 12.5; 25; 50; 100 and 200 µg) was used to stimulated J774 cells after 24h. The culture supernatant was collected for the measurement of TNF (tumor necrosis factor) by enzyme immunoassay (ELISA) which was 100 µg of Ag. In step II, was plated 5x105 J774 cells/well (stimulated with Ag). In step III was plated as well as 1.25x105 J774 cells/well (stimulated with 1x106 metacyclic trypomastigote forms of the T. cruzi). The stimulus followed the following pattern: (i) culture without IL-33 and without Ag/ T. cruzi; (ii) culture with IL-33 (10 ng/ml) and without Ag/T. cruzi; (iii) culture without IL-33 with Ag (100 µg/mL) and T. cruzi; (iv) culture with IL-33 (10ng/ml) and with Ag (100µg/mL) and T. cruzi. The cultures were evaluated at different times after the stimulus in 0h, 24h and 48h and the supernatants collected for the measurement of the inflammatory mediators: TNF, IL-17 (interleukin 17), CCL2 (C-C motif chemokine ligand 2), IL-10 (interleukin 10) by ELISA; nitrite by the Griess method and amastigote count. Differences were observed in the production of TNF, IL-17, CCL2 for groups stimulated by the Ag or T. cruzi at 24h and 48h. For the IL-10, these differences were observed only in the groups stimulated with alive forms of T. cruzi. Regarding nitrite, differences were observed in the groups stimulated with Ag or T. cruzi at 0h, 24h and 48h. The number of amastigote forms was higher in those J774 cells stimulated with IL-33. In general, both Ag and the alive T. cruzi induced the production of inflammatory mediators in J774 cells at 24h and/or 48h. IL-33 was shown to be important in the initial events of infection in cells stimulated with Ag and with the alive parasite, as well as in the production of IL-10 by infected animals. We concluded that IL-33, during the in vitro J774 cells infection by T. cruzi, drives the production of inflammatory and regulatory mediators.pt_BR
dc.identifier.citationOLIVEIRA, Daniela Silva de. Perfil de mediadores inflamatórios produzido por células da linhagem J774 após estímulo in vitro com a IL-33 e antígeno/parasito o Trypanosoma cruzi. 2020. 90 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2020.pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/12555
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.rightsabertopt_BR
dc.rights.licenseAutorização concedida ao Repositório Institucional da UFOP pelo(a) autor(a) em 28/07/2020 com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0 que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho desde que sejam citados o autor e o licenciante. Não permite o uso para fins comerciais nem a adaptação.pt_BR
dc.subjectCitocinaspt_BR
dc.subjectTrypanosoma cruzipt_BR
dc.subjectCélulaspt_BR
dc.titlePerfil de mediadores inflamatórios produzido por células da linhagem J774 após estímulo in vitro com a IL-33 e antígeno/parasito o Trypanosoma cruzi.pt_BR
dc.typeDissertacaopt_BR
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